技术分享 | 细胞培养技巧之细胞传代

 

细胞传代是细胞培养中非常重要的一个步骤，用于维持和扩增特定细胞系的数量。细胞传代的目的是保持细胞的健康状态、避免细胞老化和突变，并保证细胞的稳定性和一致性。

 
细胞代传
 

贴壁细胞传代

 

培养器皿选择：选择适合贴壁细胞传代的培养器皿，确保器皿表面干净、无菌。

 

细胞密度控制：根据细胞生长情况，控制细胞的密度。通常在细胞生长至80%～90%的密度时，适合进行传代。

 

细胞分离：使用胰蛋白酶等消化酶对细胞进行消化，以将细胞从培养器皿表面分离。消化时间和酶的浓度应根据细胞类型来确定。

 

细胞计数：对细胞进行计数，以确定传代时需要接种的细胞数量。

 

细胞离心：将细胞培养液进行离心，以沉淀细胞。离心速度和时间应根据细胞类型来确定。

 

细胞接种：去上清，加适量新鲜完全培养液吹打重悬细胞。然后转移适量细胞悬液至新培养瓶中，再加入一定量完全培养液，轻轻摇晃培养器皿，使细胞均匀分布。

 

培养条件：将培养器皿放置二氧化碳培养箱中，并提供适当的培养条件，如温度、湿度和CO2浓度。遵循细胞系的特定培养条件，以确保其正常生长和增殖。

 

悬浮细胞传代

 

细胞密度控制：根据细胞生长情况，控制细胞的密度。通常在细胞生长至80%～90%的密度时，适合进行传代。

 

细胞计数：对细胞进行计数，以确定传代时需要接种的细胞数量。

 

细胞离心：将细胞培养液进行离心，以沉淀细胞。离心速度和时间应根据细胞类型来确定。

 

培养基的更换：去除营养匮乏的旧培养液，用新的培养基代替。可以使用无菌的吸管或移液器谨慎地进行操作，避免对细胞造成机械性损伤。

 

细胞接种：将沉淀的细胞重新悬浮在新的培养基中，并将其接种到新的培养器皿中。根据细胞类型和实验要求，调整细胞密度和培养基的体积。接种后，轻轻摇晃培养器皿，使细胞均匀分布。

 

培养条件：将培养器皿放回恒温培养箱中，并提供适当的培养条件，如温度、湿度和CO2浓度。遵循细胞系的特定培养条件，以确保其正常生长和增殖。

 

细胞传代培养注意事项

 

1.在吹打过程中，不要将移液管中的液体全部排出，同时要控制吹打节奏，以避免吹出泡沫。泡沫会对细胞造成损伤，并且难以在显微镜下观察到是否所有细胞都被吹打下来。

 

2.不要等待贴壁细胞完全铺满培养皿或培养瓶，因为这可能会导致细胞生长缓慢或死亡。

 

3.对细胞进行消化时，最好不要等到细胞成片飘起，否则会影响细胞状态，并且第二天培养中会出现较多的死细胞。