上海润度生物科技有限公司
品质是生命,服务是宗旨

Quality is life, service is the tenet

网站首页  ◇  技术文章  ◇  技术分享 | 细胞培养技巧之细胞传代

技术分享 | 细胞培养技巧之细胞传代

来源:技术文章    更新时间::2023-08-28    浏览:738次
专注于细胞培养解决方案
 
细胞传代是细胞培养中非常重要的一个步骤,用于维持和扩增特定细胞系的数量。细胞传代的目的是保持细胞的健康状态、避免细胞老化和突变,并保证细胞的稳定性和一致性。
 
细胞代传
 
贴壁细胞传代
 
培养器皿选择:选择适合贴壁细胞传代的培养器皿,确保器皿表面干净、无菌。
 
细胞密度控制:根据细胞生长情况,控制细胞的密度。通常在细胞生长至80%~90%的密度时,适合进行传代。
 
细胞分离:使用胰蛋白酶等消化酶对细胞进行消化,以将细胞从培养器皿表面分离。消化时间和酶的浓度应根据细胞类型来确定。
 
细胞计数:对细胞进行计数,以确定传代时需要接种的细胞数量。
 
细胞离心:将细胞培养液进行离心,以沉淀细胞。离心速度和时间应根据细胞类型来确定。
 
细胞接种:去上清,加适量新鲜完全培养液吹打重悬细胞。然后转移适量细胞悬液至新培养瓶中,再加入一定量完全培养液,轻轻摇晃培养器皿,使细胞均匀分布。
 
培养条件:将培养器皿放置二氧化碳培养箱中,并提供适当的培养条件,如温度、湿度和CO2浓度。遵循细胞系的特定培养条件,以确保其正常生长和增殖。
 
悬浮细胞传代
 
细胞密度控制:根据细胞生长情况,控制细胞的密度。通常在细胞生长至80%~90%的密度时,适合进行传代。
 
细胞计数:对细胞进行计数,以确定传代时需要接种的细胞数量。
 
细胞离心:将细胞培养液进行离心,以沉淀细胞。离心速度和时间应根据细胞类型来确定。
 
培养基的更换:去除营养匮乏的旧培养液,用新的培养基代替。可以使用无菌的吸管或移液器谨慎地进行操作,避免对细胞造成机械性损伤。
 
细胞接种:将沉淀的细胞重新悬浮在新的培养基中,并将其接种到新的培养器皿中。根据细胞类型和实验要求,调整细胞密度和培养基的体积。接种后,轻轻摇晃培养器皿,使细胞均匀分布。
 
培养条件:将培养器皿放回恒温培养箱中,并提供适当的培养条件,如温度、湿度和CO2浓度。遵循细胞系的特定培养条件,以确保其正常生长和增殖。
 
细胞传代培养注意事项
 
1.在吹打过程中,不要将移液管中的液体全部排出,同时要控制吹打节奏,以避免吹出泡沫。泡沫会对细胞造成损伤,并且难以在显微镜下观察到是否所有细胞都被吹打下来。
 
2.不要等待贴壁细胞完全铺满培养皿或培养瓶,因为这可能会导致细胞生长缓慢或死亡。
 
3.对细胞进行消化时,最好不要等到细胞成片飘起,否则会影响细胞状态,并且第二天培养中会出现较多的死细胞。
版权所有©2024 上海润度生物科技有限公司